lncRNA来报道调控肺动脉高压

肺动脉高压（PAH）是一种血流动力学异常状态，以肺血管阻力进行性增高为主要特征，后负荷增加导致右心室肥厚，最终可导致心力衰竭。主要病理基础：血管收缩、肺血管重塑和原位血栓形成，血管重塑的重要细胞类型包括PASMC，成纤维细胞，内皮细胞和周细胞等，靶向这些细胞的共同分子有哪些呢？lncRNA来报道。技术路线：

结果：

1.过度增殖的条件下，hPASMC和周细胞上调表达TYKRIL且与其功能相关暴露于缺氧条件的人PASMC和肺周细胞、以及特发性PAH（IPAH）患者的人PASMC和肺周细胞表现出过度增殖和抗凋亡的表型。细胞RNA测序发现lncRNATYKRIL在所有条件下都被上调，细胞核和细胞质的qRT-PCR分析表明TYKRIL同时存在于细胞核和细胞质中。沉默TYKRIL后导致hPASMCs和肺周细胞增殖减少，并诱导促凋亡表型。

2.TYKRIL敲低减少体外模型中的肺血管重塑肺特发性PAH患者肺血管切片中的TYKRIL表达明显上调，沉默肺切片中TYKRIL导致内侧壁厚度减少，增殖细胞核抗原（PCNA）阳性细胞数量减少，TUNEL阳性细胞（凋亡检测）增加。

3.TYKRIL通过调节PDGFRβ表达在周细胞存活和功能中起重要作用原代人周细胞中敲除TYKRIL可有效减少增殖，损害内皮细胞的募集和减少周细胞存活。为鉴定TYKRIL的下游靶标，敲除lnc的原代人周细胞上进行RNA测序，发现各种酪氨酸激酶受体的表达下调。周细胞中TYKRIL与PDGFRβ的表达显示出正相关，敲低TYKRIL可显著降低PDGFRβ的表达。过表达TYKRIL导致TYKRIL和PDGFRβ显著上调，LNAGapmeRs与RNA引导基因共转染，消除了TYKRIL的上调并抑制了PDGFRβ表达的增加。

4.TYKRIL充当蛋白质诱饵，减少p53–p复合物的形成为进一步了解TYKRIL的分子机制，评估TYKRIL缺失对转录因子活性的影响。沉默TYKRIL后发现抑癌基因p53被激活最明显，RNA-seq通路分析表明TYKRIL敲低可调节p53信号通路相关基因。已知p53调节lncRNA的表达，但关于lncRNA依赖的活性调节机制不清楚。为研究TYKRIL如何调节p53活性，进行RNA免疫沉淀，发现表明TYKRIL与p53结合。为识别结合位点，进行Pulldown实验，发现YKRIL绑定全长p53和缺少C碳端的p53，TYKRIL不与缺乏N氮端的p53突变体（包含转录激活域）绑定。这些结果说明TYKRIL结合p53需要N氮端。p53受翻译后修饰的严格调控，例如乙酰化和磷酸化。共激活剂，例如乙酰转移酶p，介导p53乙酰化并与p53转录激活结合域，导致p53稳定，并将p53–p复合物转运到核。因此，我们使用邻位连接技术来分析敲低TYKRIL之后p53–p相互作用，发现抑制TYKRIL表达，p53-p核复合物的形成增加，TYKRIL过表达导致细胞核中p53–p水平降低。这些结果表明TYKRIL充当p53诱饵分子，可防止p53–p相互作用来激活p53。为确认TYKRIL通过p53作用于周细胞活性，沉默了p53，发现可防止TYKRIL依赖性的周细胞活力丢失。阿霉素诱导的内源性p53激活进一步证实了激活p53抑制PDGFRβ。

5.PDGFRβ的表达受TYKRIL调控，PAH患者中TYKRIL与PDGFRβ表达正相关为进一步评估疾病下TYKRIL介导PDGFRβ表达调节，检测人肺匀浆中TYKRIL和PDGFRβ的表达，发现健康对照组和PAH患者肺组织中TYKRIL和PDGFRβ表达呈显著正相关。暴露于低氧和从IPAH患者中分离的hPASMC和肺周细胞中，沉默TYKRIL会导致细胞PDGFRβ降低（图6B，C，D,E）。

结论：

1.TYKRIL维持PASMCs和周细胞的过度增殖表型，从而有助于PAH中血管的病理向内重塑。2.TYKRIL充当p53诱饵，调节PDGFRβ的表达，作为一种新型的酪氨酸激酶信号通路检查点分子。

参考文献：

LongNoncodingRNATYKRILPlaysaRoleinPulmonaryHypertensionviathep53-MediatedRegulationofPDGFRβ（AMJRESPCRITCARE）(IF:17.)

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