导读在严重创伤或重大手术后，输血无疑是挽救生命的重要治疗措施之一。随着临床输血量逐年攀升，输血所致的并发症也日益凸显。由于现有条件的限制，实际临床工作中很难保证新鲜血制品的输注。输注库存浓缩红细胞可以增加肺血管阻力，诱发肺动脉高压。因此，如何预防输血相关并发症的发生就显得尤为重要。研究背景浓缩红细胞在存储过程中会发生一系列形态学和生化学变化，我们将其称之为存储病变。随着存储时间的延长，红细胞的变形能力和生存能力逐渐减低，进而发生溶血。在存储30天后，溶血的速率将显著加快，使游离血红蛋白(Hb)在库存血中聚集。输血后，游离Hb对内皮型一氧化氮(NO)有清除作用，而内皮型NO对肺损伤具保护作用。因此，游离Hb对内皮型NO的清除作用被认为是输血相关性肺动脉高压发生的潜在机制。。研究目的探究NO能否预防输血相关性肺血管收缩、肺动脉高压的发生，提高库存血中红细胞的变形能力，延长红细胞在循环中的存活时间。研究方法一、羊自体浓缩红细胞制备1.实验动物：3-4月龄polypay羊，Wt=33±2kg2.肌内注射氯胺酮(20mg/kg)麻醉3.从左颈静脉采血ml，滤去白细胞，离心分离血浆，制备浓缩红细胞(Hct≈60%），4℃保存2-40天。注：本研究定义保存2天为新鲜浓缩红细胞(freshredbloodcell,FRBC)，保存40天为库存浓缩红细胞(storedredbloodcell,SRBC)。二、浓缩红细胞经NO预处理1.方法一：采用体外膜式氧合器，实验组用ppmNO+90%N2+10%O2的混合气体，对照组用90%N2+10%O2的混合气体，使浓缩红细胞和NO进行充分混合。2.方法二：将可释放NO的混合物和浓缩红细胞共孵育。1U浓缩红细胞与μM混合物于25℃共孵育20min，以保证混合物中的NO充分释放。三、输血1.将血制品预热至37℃2.输血量：总血量的14%(体重的6.5%计算总血量)3.输血速度：30min输注1U浓缩红细胞(ml)四、研究内容及结果：（一）比较NO干预前后血制品中(A)细胞外游离Hb浓度(B)游离Hb对NO的清除能力(C)细胞内高铁血红蛋白浓度(D)细胞外高铁血红蛋白浓度。结果：(A)1.SRBC组游离Hb较FRBC组显著增加(P=0.)2.NO干预组较未干预组游离Hb浓度无明显改变(B)SRBCNO干预组内皮型NO的清除量较NO未干预组显著降低(p=0.)结果：FRBC/SRBCNO干预组较NO未干预组细胞内、外高铁血红蛋白均显著增加综上：（1）经NO预处理并不增加溶血的发生（2）NO可能通过将氧合血红蛋白转变为高铁血红蛋白，从而降低内皮型NO的清除率（二）比较输血前、输血中、输血后(A)平均肺动脉压力(pulmonaryarterypressure,PAP)(B)肺血管阻力指数(pulmonaryvascularresistanceindex,PVRI)结果：1.FRBC组PAP/PVRI在输血中、输血后较输血前无明显改变。2.SRBCNO未干预组PAP在输血中、输血后均较输血前明显增加，PVRI在输血过程中10-30min一过性增加，而NO干预组则无明显改变。综上，浓缩红细胞经NO预处理后可防止输血相关性肺血管肺血管收缩和肺动脉高压的发生（三）红细胞半衰期的测定用生物素标记浓缩红细胞，输血后，用流式细胞仪检测循环中生物素化的红细胞结果：1.输血1h后，FRBC组循环中剩余的红细胞为94.2±4.6%，SRBCNO未干预组为75.3±5.8%，NO干预组为86.8±8.1%2.输血24h后，循环中剩余的红细胞FRBCNO未干预组为90.8±4.1%，NO干预组为91.4±1.4%；SRBCNO未干预组为73.4±3.8%，NO干预组为78.3±6.3%3.输血7天后，各组间无显著性差异综上，经NO预处理后可以提高输血早期（1-24h）循环中红细胞的存活时间。（四）红细胞变形能力的测定采用微流体装置测定红细胞的通过速率间接评估红细胞的变形能力结果：1.FRBC组平均红细胞通过速率显著高于SRBC组2.SRBCNO干预组平均红细胞通过速率较SRBCNO未干预组显著增加综上，经NO预处理后可以提高红细胞的变形能力研究结论1.经NO预处理后可将库存浓缩红细胞中的游离Hb氧化为高铁血红蛋白，减轻游离Hb对内皮型NO的清除作用，进而防止输血相关性肺动脉高压的发生。2.经NO预处理后可以提高库存血中红细胞的变形能力和其在循环中的生存时间。3.经NO预处理库存浓缩红细胞这一方法有望成为防止输血相关性肺动脉高压的发生，延长红细胞的生存时间的有效措施。
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